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【[本科生实验]从酵母中提取RNA的试验中,加碱沸水浴后为什么需要调pH至弱酸性?具体实验步骤(来自实验指导):称5g干酵母粉置于100ml烧杯中,加入40ml0.2%NaOH溶液,沸水浴上加热30min,经常搅拌】
更新时间:2024-05-02 11:53:17
1人问答
问题描述:

[本科生实验]从酵母中提取RNA的试验中,加碱沸水浴后为什么需要调pH至弱酸性?

具体实验步骤(来自实验指导):

称5g干酵母粉置于100ml烧杯中,加入40ml0.2%NaOH溶液,沸水浴上加热30min,经常搅拌.

然后加入数滴乙酸溶液使提取液呈酸性(石蕊试纸检查),3000r/min离心15min.取上清液,加入10ml酸性乙醇,边加边搅动.加毕,静置,待RNA沉淀完全后,离心.

滤渣先用乙醇洗两次,每次用10ml.再用无水乙醇洗两次,每次10ml,洗涤时间可用细玻璃棒小心搅动沉淀.最后用布氏漏斗抽滤,沉淀在空气中干燥.称量所得RNA粗品的重量,

个人推测可能原因:

1.pH5~6为大多数氨基酸的等电点(除苏氨酸、赖氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、丝氨酸外都在6附近吧),调pH可以沉淀原有的和碱性条件下水解少量蛋白质产生的氨基酸

2.碱性水浴条件下RNA水解为寡聚核苷酸而DNA不水解,调pH为了沉淀DNA(参考生物化学教材上关于稀碱法分离RNA的说法,但实验条件有所不同)

3.为了防止RNA过量水解成小分子而难以在乙醇中沉淀析出(参考生物化学关于RNA化学性质的说法)

问:

真正的目的是什么样的?我的推测正确么?

史香运回答:
  调PH至弱酸主要是为了达到蛋白质的等电点来沉淀蛋白质,然后离心去除蛋白后,还要进一步加酸性乙醇是为了达到rna的等电点(ph约为2)来沉淀rna
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